【2017年整理】以前做冰冻切片-金锄头文库

1冰冻切片与漂片豁免组化先前做冰冻切片,常常相遇成绩,后头,对文档停止了检索。,我将本身与试验停止构成。,总算找到了在某种程度上钟快捷而好的办法。, 让we的全部的格形式一同分享吧。1。 大脑葡萄汁在冰上推拿。,气体也葡萄汁是冷的2。 30%的糖就十足了。,最幸运地中部的换气体。 , 20%不克不及做3。 沉淀后高温腌制食物,we的全部的格形式葡萄汁神速上冻。, 最好推拿。4。在干冰上。 最重要的在某种程度上, 贯注的时分, 不要用 0.1M PB, 用 PBS。 我先前不晓得。,好多书是写成的。 0.1M PB,后头,我发如今我本身的应用中有使有裂纹。 为了为了,我也做了在某种程度上钟对照试验。,比分 PBS 上进相当多的, 我不晓得为什么。, 但命运的确那样地。 . 理论地,高浓度气体更以某人为受款人加防护装置细胞。 设想制成磷酸化对称体,纪念在贯注液中使混合相当多的压器。,如 NaF 我用糖。 25%/PBS 的,不更衣气体,简直为了夜间 12 一小时后就会下沉。。嵌入时不要恢复的。,但要谨慎应用一匙糖纸来缓和一匙糖答案。,不然,设想我切片,我会做切片。,先用 20%一匙糖(Pb) 混合底,再用 30%一匙糖沉淀物,这是更足够的的脱水。。压面机的平均高烧为-22。 度后,后来地把内嵌的脑安排放出来。。水化缺乏也会体现CMOS 芯片上的洞。,这部影片易于解决接受打赌。,独特的蹩脚。。我早已做了许久了。,比分相当好的的。。取脑后,最接近的进入液化氮?我试过了。,因脑安排中有更多的水。,液化氮破败后,可最接近的断开,撤销TH产生。:率先预备在某种程度上钟真空吸杯。,倒入过量的液化氮。,后来地把纸杯放在受范的制品里(可塑的或受范的禁用) ,后来地在受范的制品里放铺地板金属。,撤销纸杯翻转。,在兽头部被小卡车随后,把它放在在某种程度上钟小锡纸上。,后来地将锡纸转变到杯说得中肯感光版上。,盖上真空吸杯。,3-5 分钟后,大脑的色是清白的。,冰冻吃光了。,后来地用锡纸包装大脑。,上80 制冰机的年深月久腌制食物。脑片讽刺的后的腌制食物:1、率先,用手指轻松地经过玻片。,大脑切片附着在下跌上。。2、37 烘干炉缓和。3、把它放在在某种程度上钟切片箱里。,盖紧盒盖,胶带是用胶带决定的。,表面战利品袋包装狭隘的。,撤销夸大进入。。AT – 20 它可以腌制食物半载前述事项。,AT – 80 可以存款岁前述事项。。避开频繁翻开盒子。。2想问 PBS 的腔调,责怪! PBS 腔调(~ ) (500 ml)Na2HPO4?12H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 混合ML,完好液化后,用 H3PO4 调 PH 值至 ~。先前创造或应用。 4 短期腌制食物。用 Google 搜索并发觉好多在线。 PBS 腔调是:NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,尺寸 pH 到 (pH值 有益 Na2HPO4 或 KH2PO4 修剪也有益的。 HCl we的全部的格形式需求注重的是,通常称为浓度 它指的是全部的汽水在缓冲答案说得中肯浓度。,而非 Na 水合氢或 K 水合氢的浓度,Na 水合氢与水合氢 K 水合氢只用于尺寸渗透压力。。我计算了以下两种腔调:磷酸盐的浓度 ,而 jmfan 腔调更精密。,但发觉其腔调中不含钾水合氢。,据我看来晓得它假设会心情渗透压力? PH 的成绩,we的全部的格形式常常应用它。 HCl 调的,它缺乏被应用。 H3PO4 或其盐,有缺乏直言的的虾? PBS 有很多食谱。,无边的异体同形,we的全部的格形式在在这里说什么 PBS 磷酸钠缓冲溶液,自然,磷酸钾缓冲溶液。,换句话说,KPBS,我做 IHC 应用磷酸钠缓冲溶液。,这 2 对试验的心情不理所当然很大。。您可以检查与化验介绍人中间场所的相当多的文档。,文字试验办法,用磷酸钠缓冲溶液或磷酸钾缓冲溶液制表吗?。只要接管 PH 成绩,它通常受弱酸或弱碱性水合氢的尺寸。,因而扭伤 PBS 的 PH 自然,它是H3PO4。 来尺寸的,自然用 HCL 或许盐可以做到这在某种程度上。,但不经用。,同时 HCL 它是镪水,挥发性,短时间修剪一下就轻易了。:我给你的菜肴,设想水是 PH 没成绩。,基准溶解物的一致的才能。 PBS 的 PH 为 摆布,像可以停止修剪。 PH 换句话说,从事,户主可以坚强地看3。 PBS 指套腔调: PBS 腔调(~) (500 ml Na2HPO412H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 ML充当顾问腔调(NaCl) 8.0g ;KCl 0.2g ;Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,尺寸 pH 到 )是 1X DULBECCO S PHOSPHATE BUFFERED SALINE (PBS) WITHOUT CALCIUM, MAGNESIUM,注重,是杜尔巴卓 改良腔调,约分 D-PBS,同时进口钙和镁的腔调。,像,源自 INVITROGEN 订的 Dulbecco s 汽水缓冲溶液 Saline (D-PBS) (10倍) liquid Contains calcium and 镁。 PBS – Phosphate Buffered Saline Formulation(HyClone):厂家的腔调跟决定都很变结实我试验战利品冰冻切片厚 20 微米,它是独特的好的,它是,我所做的是膜接受器涂蛋白于。。概括地说,切片构成好。,玻璃质颜料,细胞整队能够更为自明。,尽管监视完好的单飞细胞能够是努力的的。,因它能够被割断进入细胞体。,碎片难以讽刺的。,后头我读了相当多的提出。,有 14 微米的,20 微米的,30 微米的,甚至常 40、50 微米的,在文档中也有变化多的的版本。,根据我所持的论点这能够与涂蛋白于质散布的检测关于。、性质和丰富性等。,我 20 经目镜颜料,颜料胜利良好。,但我缺乏剪。 30 微米构成,哈哈-告知我工业碎片时的工业熟练。,安排吓呆时,葡萄汁在安排上。、在上面添加胜任的量。 OCT。有组织的安排、上面有必然的专家。,切片时,安排应外行的在横向地位。,这撤销了安排切片追逐说得中肯收回。。切片葡萄汁与安排批准。,避开因切片不完好而漏诊。。 手在安排时不克不及使心绪不宁。,同时在贴附安排时手责任在某种程度上钟下至一片的举措。拉拔时刀片应专家。,它理所当然从全力上切到刀尖。,避开讽刺的讽刺的。,安排块钳应用无牙钳。、温顺、避开挤压等。。你的切片是延续的。 24 孔板?设想是如此,,将谈谈切玩后来地怎地选择脑片做组化的?就是说假设要拔取某在某种程度上钟或专有的地位的脑片( eg, bregma -1.2, 0.8, 2.2, ECT),理所当然详细做些什么? 12 舷窗细胞培育物板(加防护装置液),充当顾问我的倚靠帖子。,可以搜索腌制食物,当你需求颜料时,取出在某种程度上钟洞。 free floating。切片的装饰次源自 A1,A2,A3B1,B2C4,第一轮后(每孔一孔) ,持续从 A1 开端入伙 C4,颜料时要取一小孔。,每个洞都是一套全脑切片。,设想切片厚度为 30微米,因而每个影片的程度间隔都是 30微米×12,4你也可以把它放出来。 10 细分影片,再次外行的。如此在某种程度上钟词,每细分影片都是 30uMX10。你也可以把它剪下来。 20,40,50uM,基准我的盘问。论场所,we的全部的格形式葡萄汁请教兽剖析的地图集。。你可以使出现一套影片。,作 CV 颜料,这部影片将是你后来地的规范充当顾问。。CV颜料后,你易于解决区别变化多的的地域。,嗣后,你会晓得哪个洞能够陈述。。你在订出一种对称体。,二抗,ABC 它在哪里?据我看来节省对称体。,放在了 袖珍使离心管。后来地 37 孵卵一小时。我用画笔来拍影片,我常常把它们粘起来。,产生是什么?色在文明社会板上。。可以用接种疫苗细菌用的“闪亮的”缠成在某种程度上钟“p”体现,用于捉鱼,因这种电线具有上进的可塑度。,它缺点这么胶着地应用。,大部分地缺乏损毁脑片。。我普通也会订出对称体。 ep 管中。在豁免组化的追逐中,渔获物被A,最适当的当胶片放在滑板上时才应用用力擦洗。。都洗平息。 24 孔板,时而它也用于孵化。 ml 的 EP 管。次要安心对称体的稀释的。,设想稀释的度很高,离缩减气体音量以节省对称体。,也用 24 孔板培育。1。我用生理盐水贯注激励。,后来地顶替应用 3贯注的施展 ,各 150千分之一升(捕鼠)。2。 4%3浸渍 1 夜;先沉 20%一匙糖,后沉 30%一匙糖(供应用) 0.1M PB 使混合) ,20% 一匙糖底可以应用。,we的全部的格形式的发现是 再加30%天的糖。,不然,讽刺的膜是脆的。,易成形薄带。3. 撤销切片说得中肯孔,液化氮切削前的紧的上冻 1min,切冰机 -22℃)15min 后层理。we的全部的格形式先前缺乏液化氮速冻。,被切断的影片都是空的。。3、用 的 PBS 捕鼠脑安排贯注:鼠用 200ml 贯注液 。4、后来地应用它 的生理盐水 贯注冲洗(200千分之一升) 。5、脑准假。6、用 25 – 30%糖浸泡 12—16 小时。取材,切片。但在切片垄断,滤纸将被用来吸糖。。7、冰冻压面机的高烧分二步。盒子外面的高烧是-20。 度,刀架的高烧为-16。 度。8、为了不剥离膜,聚L-二氨基己酸可以涂布在CLE上。。9、设想有备选的豁免安排化学治疗力。。率先是捉鱼的办法。,这感触太费力了。。发展企业主的办法也葡萄汁供认水草。,实则,我常常应用用针刺法麻醉针的办法。,这部影片要接受打赌。 24 孔中,独特的神速,水的在弱损毁试棒。,户主的做法很能够损坏标本。。5秒,这种修补办法相当繁琐。,用力擦洗可以相当钩形用铅笔写。,补片在培育皿中停止。,先填满培育皿。 PBS(最好缺点水等)。,把下跌放在淘金上。,一面在盘子枝节的。,体现在某种程度上钟精干的的角度。,将切片用用针刺法麻醉针(做成的捞勺)捞片于培育皿中(如此全程都在供以水推拿加防护装置标本) ,用钩子笔温柔地大批赃物标本的正面(拖曳),如此的试棒在供以水并非易事皱纹或破败。 ,将标本拖到滑板上的好的地位。,笔尖,与标本准假,富余的。 PBS 将依照培育皿。 PBS 气体流入培育皿,如此在某种程度上钟词标本出发的水会微少(这在某种程度上很重要,当你在显微镜下看这部影片时,你晓得为什么。!切片为捕鼠脊髓。,接近在 10 张摆布,因隙缝很小。,面积越小,切片的接近就越小。。 盒子里有依赖某人生活。。这块板是由创造商创造的。。扩张稻草的直径。,用勇气火焰器烤焦。。路堤补丁的使连续。。Triton—100,如今我正成为气体陈述。,让我告知你一件事。,我把决定液放出来。 1 以千分之一升包装。,在添加前应用枪头。 3 袖珍火蜥蜴,触球顿是油性的。,枪头外壁轻易沾污。,添加到决定液说得中肯气体量更多。,导致颜料战败。如今我要用纸擦外堤。,就没成绩了。在相当多的命运下,这是非必需的的。。颜料和裱糊的办法叫。 whole-mount,安排标本包埋。这种办法通常是厚切片的。,可达成 100um,更厚。因而户主不理所当然担忧附件。,你可以在手术中最接近的应用缠捏钳。。这种办法的优点是它更适于眼睛的。,第三维更强。更具统计资料意思。尽管这种影片在工业追逐中相当引起麻烦的。,因切片构成厚。,还需求 triton 跨膜等踩。激光共聚焦最好用于监视。。最重要的是破坏相当多的对称体。。O(∩_∩)O~5

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