【2017年整理】以前做冰冻切片-金锄头文库

1冰冻切片与漂片豁免组化先前做冰冻切片,老是对决成绩,后头,对档案停止了检索。,我将本人与试验停止对照。,最后找到了任何人快捷而好的方式。, 让咱们一齐分享吧。1。 大脑不得已在冰上整齐。,气体也不得已是冷的2。 30%的糖就十足了。,最幸运地亲密的换气体。 , 20%不克不及做3。 沉淀后高温警惕,咱们不得已神速解冻。, 最好整齐。4。在干冰上。 最重要的些许, 贯注的时分, 不要用 0.1M PB, 用 PBS。 我先前不实现。,很多的书是写成的。 0.1M PB,后头,我发如今我本人的运用中有缺点。 为了为了,我也做了任何人对照试验。,比分 PBS 却更相当多的, 我不实现为什么。, 但制约的确十分的。 . 抽象地,高浓度气体更照顾警惕细胞。 条件制成磷酸化对称体,使想起在贯注液中放针相当多的延缓剂。,如 NaF 我用糖。 25%/PBS 的,不顶替气体,不管怎样为了夜间 12 一小时后就会下沉。。嵌入时不要更新。,但要谨慎运用亲爱的纸来呆滞的亲爱的Aquarius水瓶座。,要不然,条件我切片,我会做切片。,先用 20%亲爱的(Pb) 混合底,再用 30%亲爱的沉淀物,这是更足够的的脱水。。显微镜用晒鱼架切片机的平均高烧为-22。 程度后,继把内嵌的脑布局放出来。。水化缺乏也会成形圆片上的洞。,这部影片简单明了演示。,十分可惜。。一向这样的事物做了相当长的时间,比分相当好的。。取脑后,率直的进入液态氮?我试过了。,因脑布局中有更多的水。,液态氮破败后,可率直的断开,垄断TH发作。:率先预备任何人真空吸杯。,倒入特有的金额的液态氮。,继把纸杯放在一杯里(外科修补术或受范的禁用) ,继在一杯里放铺地板的材料金属。,垄断纸杯翻转。,在牲口头部被搭车后来,把它放在任何人小锡纸上。,继将锡纸转变到杯击中要害狭板上。,盖上真空吸杯。,3-5 分钟后,大脑的色是留出空白处的。,冰冻填写了。,继用锡纸计入大脑。,上80 冷藏库的俗歌警惕。脑片讽刺的后的警惕:1、率先,用手指活泼地经过玻片。,大脑切片附着在下跌上。。2、37 烘干炉呆滞的。3、把它放在任何人切片箱里。,盖紧盒盖,胶带是用胶带封上的。,表面战利品袋包装严格的。,垄断潮湿进入。。AT – 20 它可以警惕半载很。,AT – 80 可以安置年纪很。。防止频繁翻开盒子。。2想问 PBS 的婴儿食品,责怪! PBS 婴儿食品(~ ) (500 ml)Na2HPO4?12H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 混合ML,完全分裂后,用 H3PO4 调 PH 值至 ~。先前创造或运用。 4 短期警惕。用 Google 搜索并被发现的事物很多的在线。 PBS 公式集是:NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,监测仪 pH 到 (pH值 可得到的东西 Na2HPO4 或 KH2PO4 整齐也可得到的东西的。 HCl 咱们需求注意到的是,通常称为浓度 它指的是缠住汽水在缓冲Aquarius水瓶座击中要害浓度。,而非 Na 水合氢或 K 水合氢的浓度,Na 水合氢与水合氢 K 水合氢只用于监测仪渗透压力。。我计算了以下两种婴儿食品:磷酸盐的浓度 ,而 jmfan 公式集更严格。,但被发现的事物其婴儿食品中不含钾水合氢。,我以为实现它愿意会比分渗透压力? PH 的成绩,咱们老是运用它。 HCl 调的,它缺少被运用。 H3PO4 或其盐,有缺少详述的的虾? PBS 有很多食谱。,无端的胜任的,咱们在在这里说什么 PBS 磷酸钠缓冲溶液,自然,磷酸钾缓冲溶液。,更确切地说,KPBS,我做 IHC 运用磷酸钠缓冲溶液。,这 2 对试验的比分不必然要很大。。您可以检查与测验贮藏所相干的相当多的文档。,字母试验方式,用磷酸钠缓冲溶液或磷酸钾缓冲溶液打手势吗?。竟至接管 PH 成绩,它通常受弱酸或弱碱性水合氢的监测仪。,因而用力拉 PBS 的 PH 自然,它是H3PO4。 来监测仪的,自然用 HCL 或许盐可以做到这些许。,但不经用。,并且 HCL 它是镪水,挥发性,轻微地整齐一下就轻易了。:我给你的食谱,条件水是 PH 没成绩。,理性溶解物的应和高质量的。 PBS 的 PH 为 摆布,相应地可以停止整齐。 PH 更确切地说,合用的,地主可以断然地看3。 PBS 指套公式集: PBS 婴儿食品(~) (500 ml Na2HPO412H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 ML顾及公式集(NaCl) 8.0g ;KCl 0.2g ;Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,监测仪 pH 到 )是 1X DULBECCO S PHOSPHATE BUFFERED SALINE (PBS) WITHOUT CALCIUM, MAGNESIUM,注意到,是杜尔巴卓 改善公式集,省略 D-PBS,因此意思钙和镁的婴儿食品。,诸如,因为 INVITROGEN 订的 Dulbecco s 汽水缓冲溶液 Saline (D-PBS) (10倍) liquid Contains calcium and 镁。 PBS – Phosphate Buffered Saline Formulation(HyClone):厂家的婴儿食品跟决定都很简化我试验战利品冰冻切片厚 20 微米,它是十分好的,它是,我所做的是膜觉得器官卵白。。大抵,切片对照好。,透亮着色,细胞典范可能性更为显著。,只是环顾完全的多于对方的一次击球细胞可能性是纠葛的。,因它可能性被割断进入细胞体。,晒鱼架难以讽刺的。,后头我读了相当多的档案。,有 14 微米的,20 微米的,30 微米的,甚至没有活力的 40、50 微米的,在档案中也有不相同的版本。,据我的观点这可能性与卵白质散布的检测参与。、独特性和丰富性等。,我 20 经测圆器着色,着色比分良好。,但我缺少剪。 30 微米对照,哈哈-告知我工业晒鱼架时的工业灵巧。,布局严寒的时,不得已在布局上。、在上面添加特有的的量。 OCT。有组织的布局、上面有必然的临界的。,切片时,布局应世俗的在横向可容纳若干座位。,这垄断了布局切片工艺流程击中要害皱缩。。切片不得已与布局相似物。,防止因切片单独地雄蕊或雌蕊的而漏诊。。 手在布局时不克不及石头。,并且在贴附布局时手需要的东西任何人下至一段时间的举措。拉拔时刀片应狡猾的。,它必然要从柄上切到刀尖。,防止讽刺的讽刺的。,布局块钳运用无牙钳。、使温和、防止挤压等。。你的切片是延续的。 24 孔板?条件是这样的事物,,愿意谈谈切玩后来的怎样选择脑片做组化的?就是说假设要拔取某任何人或各自的可容纳若干座位的脑片( eg, bregma -1.2, 0.8, 2.2, ECT),必然要详细做些什么? 12 洞口细胞培育物板(警惕液),顾及我的别的帖子。,可以搜索警惕,当你需求着色时,取出任何人洞。 free floating。切片的评价按次因为 A1,A2,A3B1,B2C4,第一轮后(每孔一孔) ,持续从 A1 开端入伙 C4,着色时要取一小孔。,每个洞都是一套全脑切片。,条件切片厚度为 30微米,因而每个影片的程度间隔都是 30微米×12,4你也可以把它放出来。 10 影片影片,再次世俗的。这样的事物任何人词,每影片影片都是 30uMX10。你也可以把它剪下来。 20,40,50uM,理性我的盘问。论使适应,咱们不得已会诊牲口分解的地图集。。你可以使出现一套影片。,作 CV 着色,这部影片将是你后来的的规范顾及。。CV着色后,你简单明了区别不相同的地域。,嗣后,你会实现哪个洞可能性定居。。你在孵化一种对称体。,二抗,ABC 它在哪里?我以为节省对称体。,放在了 袖珍离心断裂机管。继 37 孵卵一小时。我用画笔来拍影片,我老是把它们粘起来。,发作是什么?色在文明社会板上。。可以用注射疫苗细菌用的“背后操纵的势力”聊天的成任何人“p”使适应,用于捉鱼,因这种电线具有却更的柔度。,它归咎于这么死尸地运用。,大致如此缺少损耗脑片。。我普通也会孵化对称体。 ep 管中。在豁免组化的工艺流程中,渔获物被A,单独地当胶片放在滑板上时才运用取消。。都洗结束。 24 孔板,时而它也用于孵化。 ml 的 EP 管。次要感兴趣对称体的冲淡。,条件冲淡度很高,省掉放针气体显得庞大以节省对称体。,也用 24 孔板培育。1。我用生理盐水贯注心脏的。,继代替运用 三聚甲醛贯注的配备 ,各 150千分之一升(告密)。2。 4%三聚甲醛浸渍 1 夜;先沉 20%亲爱的,后沉 30%亲爱的(供运用) 0.1M PB 场地) ,20% 亲爱的底可以运用。,咱们的经历是 再加30%天的糖。,要不然,讽刺的膜是脆的。,易成形薄带。3. 垄断切片击中要害孔,液态氮切削前的短时间做成的解冻 1min,切冰机 -22℃)15min 后床。咱们先前缺少液态氮速冻。,被使死亡的影片都是空的。。3、用 的 PBS 告密脑布局贯注:鼠用 200ml 贯注液 。4、继运用它 的生理盐水 贯注冲洗(200千分之一升) 。5、脑断裂。6、用 25 – 30%糖浸泡 12—16 小时。取材,切片。但在切片垄断,滤纸将被用来吸糖。。7、冰冻显微镜用晒鱼架切片机的高烧分二步。盒子外面的高烧是-20。 度,刀架的高烧为-16。 度。8、为了不剥离膜,聚L-二氨基己酸可以涂布在CLE上。。9、条件有其他的豁免布局化学处理。。率先是捉鱼的方式。,这觉得太费力了。。楼房企业家的方式也不得已承认水草。,确实,我老是运用用针灸术治疗针的方式。,这部影片要演示。 24 孔中,十分神速,水的在不熟练的损耗品尝。,地主的做法很可能性损坏标本。。5秒,这种修补方式相当繁琐。,取消可以开始钩形用铅笔写。,补片在培育皿中停止。,先使充满培育皿。 PBS(最好归咎于水等)。,把下跌放在严厉的批评上。,一面在盘子使渐进。,成形任何人认为的角度。,将切片用用针灸术治疗针(做成的捞勺)捞片于培育皿中(这样的事物全程都在水生的整齐警惕标本) ,用钩子笔柔和地拖拽标本的正面(拖曳),这样的事物的品尝在水生的不容易皱纹或破败。 ,将标本拖到滑板上的正当可容纳若干座位。,笔尖,与标本断裂,富余的。 PBS 将遵照培育皿。 PBS 气体流入培育皿,这样的事物任何人词标本停止的水会娇小的(这些许很重要,当你在显微镜下看这部影片时,你实现为什么。!切片为告密脊髓。,标号在 10 张摆布,因孔很小。,面积越小,切片的标号就越小。。 盒子里有用海绵吸收。。这块板是由创造商创造的。。放针稻草的直径。,用勇气发出火焰器使成焦土。。便签本补丁的环。。Triton—100,如今我正是气体条款。,让我告知你一件事。,我把封上液放出来。 1 以千分之一升包装。,在添加前运用枪头。 3 袖珍耐火的人,向球门踢球的权利顿是油性的。,枪头外壁轻易沾污。,添加到封上液击中要害气体量更多。,事业着色输掉。如今我要用纸擦外堤。,就没成绩了。在相当多的制约下,这是无须的。。着色和裱糊的方式叫。 whole-mount,布局标本包埋。这种方式通常是厚切片的。,可遂愿 100um,更厚。因而地主不必然要使烦恼附件。,你可以在手术中率直的运用聊天的钳板。。这种方式的优点是它更直观的。,第三维更强。更具统计数字意思。只是这种影片在工业工艺流程中相当费心。,因切片对照厚。,还需求 triton 跨膜等手续。激光共聚焦最好用于环顾。。最重要的是徒劳相当多的对称体。。O(∩_∩)O~5

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