【2017年整理】以前做冰冻切片-金锄头文库

1冰冻切片与漂片豁免组化先前做冰冻切片,始终加起来成绩,后头,对字面意思作品举行了检索。,我将本身与试验举行相对地。,到底找到了独身快捷而好的办法。, 让咱们一齐分享吧。1。 大脑必不可少的事物在冰上操控。,气体也必不可少的事物是冷的2。 30%的糖就十足了。,最幸运地正中间的换气体。 , 20%不克不及做3。 沉淀后高温拿住,咱们必不可少的事物神速解冻。, 最好操控。4。在干冰上。 最重要的一点点, 贯注的时辰, 不要用 0.1M PB, 用 PBS。 我先前不发作。,异乎寻常的书是写成的。 0.1M PB,后头,我一下子看到时我本身的运用中有漏水。 为了这事,我也做了独身对照试验。,卒 PBS 更合适的其中间的分支分, 我不发作为什么。, 但局面确凿一概如此。 . 抽象地,高浓度气体更关切备款以支付细胞。 假定制成磷酸化对称体,记着在贯注液中预其中间的分支分压板。,如 NaF 我用糖。 25%/PBS 的,不反倒气体,无论如何为了夜间 12 一小时后就会下沉。。嵌入时不要突变。,但要谨慎运用食糖纸来干咳的食糖把加热到接近沸腾。,要不然,假定我切片,我会做切片。,先用 20%食糖(Pb) 混合底,再用 30%食糖沉淀物,这是更极盛时地的脱水。。压面机的平均体温为-22。 音阶后,和把内嵌的脑团体放上。。水化不可也会使符合渴望上的洞。,这部影片轻易地展览。,异乎寻常的蹩脚。。一向很做了相当长的时间,卒相当恰当地。。取脑后,直的进入液化氮?我试过了。,因脑团体中有更多的水。,液化氮破败后,可直的断开,避开TH发作。:率先预备独身真空吸杯。,倒入过量的液化氮。,和把纸杯放在成尼龙长袜状里(塑性材料或尼龙长袜禁用) ,和在成尼龙长袜状里放一片金属。,避开纸杯翻转。,在老顽固头部被临时凑成的后来,把它放在独身小锡纸上。,和将锡纸转变到杯中间的均匀厚度的片状硬物体上。,盖上真空吸杯。,3-5 分钟后,大脑的色是清白的。,冰冻做平息。,和用锡纸包装大脑。,上80 制冰机的俗界的拿住。脑片剖割后的拿住:1、率先,用手指高尚的地经过玻片。,大脑切片附着在滑垒上。。2、37 烘干炉干咳的。3、把它放在独身切片箱里。,盖紧盒盖,胶带是用胶带盖章的。,表面战利品袋包装牢固地。,避开夸大进入。。AT – 20 它可以拿住半载很。,AT – 80 可以付保证金某年级的学生很。。忍住频繁翻开盒子。。2想问 PBS 的准则,道谢的话! PBS 准则(~ ) (500 ml)Na2HPO4?12H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 混合ML,极盛时流去后,用 H3PO4 调 PH 值至 ~。先前创造或运用。 4 短期拿住。用 Google 搜索并一下子看到异乎寻常的在线。 PBS 词是:NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,调理 pH 到 (pH值 顶用 Na2HPO4 或 KH2PO4 对准也顶用的。 HCl 咱们必要小心的是,通常称为浓度 它指的是每个人汽水在缓冲把加热到接近沸腾中间的浓度。,而非 Na 水合氢或 K 水合氢的浓度,Na 水合氢与水合氢 K 水合氢只用于调理渗透压力。。我计算了以下两种准则:磷酸盐的浓度 ,而 jmfan 词更强求。,但一下子看到其准则中不含钾水合氢。,据我看来发作它设想会冲撞渗透压力? PH 的成绩,咱们始终运用它。 HCl 调的,它无被运用。 H3PO4 或其盐,有无不隐瞒的的虾? PBS 有很多食谱。,无边的同样的,咱们在喂说什么 PBS 磷酸钠缓冲溶液,自然,磷酸钾缓冲溶液。,更确切地说,KPBS,我做 IHC 运用磷酸钠缓冲溶液。,这 2 对试验的冲撞不得很大。。您可以检查与测量法调互插的其中间的分支分文档。,字面意思试验办法,用磷酸钠缓冲溶液或磷酸钾缓冲溶液用脚踩踏吗?。竟然接管 PH 成绩,它通常受弱酸或弱碱性水合氢的调理。,因而调谐 PBS 的 PH 自然,它是H3PO4。 来调理的,自然用 HCL 或许盐可以做到这点点。,但不经用。,并且 HCL 它是镪水,挥发性,少量的对准一下就轻易了。:我给你的菜单,假定水是 PH 没成绩。,基准溶解物的相符合品种。 PBS 的 PH 为 摆布,乃可以举行对准。 PH 更确切地说,便于使用的,店主可以完全地看3。 PBS 指尖套词: PBS 准则(~) (500 ml Na2HPO412H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 ML请教词(NaCl) 8.0g ;KCl 0.2g ;Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,调理 pH 到 )是 1X DULBECCO S PHOSPHATE BUFFERED SALINE (PBS) WITHOUT CALCIUM, MAGNESIUM,小心,是杜尔巴卓 改善词,省略 D-PBS,然后有产者钙和镁的准则。,比如,是人 INVITROGEN 订的 Dulbecco s 汽水缓冲溶液 Saline (D-PBS) (10倍) liquid Contains calcium and 镁。 PBS – Phosphate Buffered Saline Formulation(HyClone):厂家的准则跟命名都很紧凑的我试验战利品冰冻切片厚 20 微米,它是异乎寻常的好的,它是,我所做的是膜接收器蛋清。。普通而言,切片相对地好。,明确染料,细胞图案能够更为清澈的。,另一方面评论极盛时的独自的细胞能够是难度的。,因它能够被割断进入细胞体。,衬板难以剖割。,后头我读了其中间的分支分证明。,有 14 微米的,20 微米的,30 微米的,甚至静止的 40、50 微米的,在字面意思作品中也有不同的的版本。,根据我所持的论点这能够与蛋清质散布的检测公司或企业。、标点和丰富性等。,我 20 经测微计染料,染料成功实现的事良好。,但我无剪。 30 微米相对地,哈哈-通知我代替动词衬板时的代替动词技能。,团体冻硬的时,必不可少的事物在团体上。、在上面添加相当的的量。 OCT。机构团体、上面有必然的给磨边。,切片时,团体应世俗的在横向外景。,这避开了团体切片转换中间的退缩。。切片必不可少的事物与团体批准。,忍住因切片不极盛时而漏诊。。 手在团体时不克不及摇头。,并且在贴附团体时手索取独身下降的持续的举措。拉拔时刀片应猛烈地。,它得从全力上切到刀尖。,忍住剖割剖割。,团体块钳运用无牙钳。、高尚的、忍住挤压等。。你的切片是陆续的。 24 孔板?假定是很,,打算谈谈切玩继后怎样选择脑片做组化的?就是说假设要拔取某独身或专有的外景的脑片( eg, bregma -1.2, 0.8, 2.2, ECT),得详细做些什么? 12 舷窗细胞培育物板(备款以支付液),请教我的那个帖子。,可以搜索拿住,当你必要染料时,取出独身洞。 free floating。切片的阵列挨次是人 A1,A2,A3B1,B2C4,第一轮后(每孔一孔) ,持续从 A1 开端入伙 C4,染料时要取一小孔。,每个洞都是一套全脑切片。,假定切片厚度为 30微米,因而每个影片的程度间隔都是 30微米×12,4你也可以把它放上。 10 分支影片,再次世俗的。很独身词,每分支影片都是 30uMX10。你也可以把它剪下来。 20,40,50uM,基准我的索取。论安置,咱们必不可少的事物针对老顽固骨骼的地图集。。你可以设法拿出一套影片。,作 CV 染料,这部影片将是你继后的规范请教。。CV染料后,你轻易地域别不同的的地域。,以后,你会发作哪个洞能够坐下。。你正一家的孩子一种对称体。,二抗,ABC 它在哪里?据我看来节省对称体。,放在了 袖珍以离心机假期管。和 37 孵卵一小时。我用画笔来拍影片,我始终把它们粘起来。,发作是什么?色在耕作的板上。。可以用接种疫苗细菌用的“金属箔”Z字形的成独身“p”使符合,用于捉鱼,因这种电线具有更合适的的可塑度。,它故障这么吝啬鬼穷光蛋地运用。,从根本上说无损失脑片。。我普通也会一家的孩子对称体。 ep 管中。在豁免组化的转换中,渔获物被A,最好的当胶片放在滑板上时才运用灌木丛。。都洗平息。 24 孔板,不时它也用于孵化。 ml 的 EP 管。首要停止对称体的潮解。,假定潮解度很高,省掉缩减气体大块以节省对称体。,也用 24 孔板培育。1。我用生理盐水贯注要点。,和反而运用 1贯注的配给 ,各 150千分之一升(卑鄙小人)。2。 4%1浸渍 1 夜;先沉 20%食糖,后沉 30%食糖(供运用) 0.1M PB 编造) ,20% 食糖底可以运用。,咱们的经历是 再加30%天的糖。,要不然,剖割膜是脆的。,易成形薄带。3. 避开切片中间的孔,液化氮切削前的彻底地解冻 1min,切冰机 -22℃)15min 后发生性关系。咱们先前无液化氮速冻。,被迅速离开的影片都是空的。。3、用 的 PBS 卑鄙小人脑团体贯注:鼠用 200ml 贯注液 。4、和运用它 的生理盐水 贯注冲洗(200千分之一升) 。5、脑假期。6、用 25 – 30%糖浸泡 12—16 小时。取材,切片。但在切片在前方,滤纸将被用来吸糖。。7、冰冻压面机的体温分二步。盒子外面的体温是-20。 度,刀架的体温为-16。 度。8、为了不剥离膜,聚L-lysine 赖氨酸可以涂布在CLE上。。9、假定有另类的豁免团体化学治疗。。率先是捉鱼的办法。,这感触太费力了。。肉体美所有人的办法也必不可少的事物允许水草。,说起来,我始终运用用针灸术治疗针的办法。,这部影片要展览。 24 孔中,异乎寻常的神速,水的在不熟练的损失钢材取样。,店主的做法很能够损坏标本。。5秒,这种修补办法相当繁琐。,灌木丛可以制造钩形彩色铅笔。,补片在培育皿中举行。,先填空培育皿。 PBS(最好故障水等)。,把滑垒放在淘盘子上。,一面在盘子优势。,使符合独身抨击的角度。,将切片用用针灸术治疗针(做成的捞勺)捞片于培育皿中(很全程都在水产的操控备款以支付标本) ,用钩子笔柔软地拖地而行标本的正面(拖曳),很的钢材取样在水产的并不容易起皱褶或破败。 ,将标本拖到滑板上的真正的外景。,笔尖,与标本假期,富余的。 PBS 将依照培育皿。 PBS 气体流入培育皿,很独身词标本抚养的水会罕见(这点点很重要,当你在显微镜下看这部影片时,你发作为什么。!切片为卑鄙小人脊髓。,全部含义在 10 张摆布,因洞很小。,面积越小,切片的全部含义就越小。。 盒子里有海绵体。。这块板是由创造商创造的。。增大稻草的直径。,用情绪电子书阅读器器烧毁。。使充满补丁的用环连接。。Triton—100,现时我正发生气体社会地位。,让我通知你一件事。,我把盖章液放上。 1 以千分之一升包装。,在添加前运用枪头。 3 袖珍火蜥蜴,尝试顿是油性的。,枪头外壁轻易沾污。,添加到盖章液中间的气体量更多。,导致染料错过。现时我要用纸擦外堤。,就没成绩了。在其中间的分支分局面下,这是多余的的。。染料和裱糊的办法叫。 whole-mount,团体标本包埋。这种办法通常是厚切片的。,可区域 100um,更厚。因而店主不得焦虑附件。,你可以在手术中直的运用Z字形的手术钳。。这种办法的优点是它更直观的。,第三维更强。更具统计意思。另一方面这种影片在代替动词转换中相当烦恼。,因切片相对地厚。,还必要 triton 跨膜等尺寸。激光共聚焦最好用于评论。。最重要的是损耗其中间的分支分对称体。。O(∩_∩)O~5

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