【2017年整理】以前做冰冻切片-金锄头文库

1冰冻切片与漂片免疫的组化先前做冰冻切片,不断地对抗成绩,后头,对写印刷体字母举行了检索。,我将本人与试验举行构成。,总算找到了任一快捷而好的办法。, 让笔者一同分享吧。1。 大脑必不可少的事物在冰上动手术。,气体也必不可少的事物是冷的2。 30%的糖就十足了。,最幸运地中心换气体。 , 20%不克不及做3。 沉淀后高温保持原状,笔者必不可少的事物神速上冻。, 最好动手术。4。在干冰上。 最重要的短间隔, 贯注的时辰, 不要用 0.1M PB, 用 PBS。 我先前不变卖。,很好的东西书是写成的。 0.1M PB,后头,我发如今我本人的应用中有短暂的风暴。 为了这么,我也做了任一对照试验。,最后 PBS 却更某个, 我不变卖为什么。, 但境况确凿这样的事物的事物。 . 理论地,高浓度气体更放下护卫队细胞。 以防制成磷酸化对称体,纪念在贯注液中使紧密联系某个使迟滞的。,如 NaF 我用糖。 25%/PBS 的,不代替气体,无论如何为了夜间 12 一小时后就会下沉。。嵌入时不要洁净。,但要谨慎应用食糖纸来脱水保存食糖烈性酒。,另外的,以防我切片,我会做切片。,先用 20%食糖(Pb) 混合底,再用 30%食糖沉淀物,这是更正好地的脱水。。刨片机的平均高烧为-22。 度后,此后把内嵌的脑有组织的放上。。水化不可也会排队缺口上的洞。,这部影片易于表明。,不常见的坏了。。一向这样的事物做了相当长的时间,最后相当马上。。取脑后,正好进入液态氮?我试过了。,因脑有组织的中有更多的水。,液态氮破败后,可正好断开,警戒TH发作。:率先预备任一真空吸杯。,倒入过量的液态氮。,此后把纸杯放在给某物加整形里(合成树脂做的或整形禁用) ,此后在给某物加整形里放大量金属。,警戒纸杯翻转。,在人头部被收集较晚地,把它放在任一小锡纸上。,此后将锡纸转变到杯打中狭板上。,盖上真空吸杯。,3-5 分钟后,大脑的色是白色颜料的。,冰冻最后阶段了。,此后用锡纸包括大脑。,转变得80 冰柜的临时保持原状。脑片剖割后的保持原状:1、率先,用手指轻易地经过玻片。,大脑切片附着在降低上。。2、37 烘干炉脱水保存。3、把它放在任一切片箱里。,盖紧盒盖,胶带是用胶带封上的。,内部战利品袋包装严格。,警戒高温潮湿进入。。AT – 20 它可以保持原状半载在上文中。,AT – 80 可以寄存一年的期间在上文中。。戒频繁翻开盒子。。2想问 PBS 的照方配药,感激! PBS 照方配药(~ ) (500 ml)Na2HPO4?12H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 混合ML,和谐的答案后,用 H3PO4 调 PH 值至 ~。先前创造或应用。 4 短期保持原状。用 Google 搜索并发觉很好的东西在线。 PBS 表情是:NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,容纳 pH 到 (pH值 使对某人有利 Na2HPO4 或 KH2PO4 修补亦使对某人有利的。 HCl 笔者需求当心的是,通常称为浓度 它指的是一切汽水在缓冲烈性酒打中浓度。,而非 Na 水合氢或 K 水合氢的浓度,Na 水合氢与水合氢 K 水合氢只用于容纳渗透压力。。我计算了以下两种照方配药:汽水的浓度 ,而 jmfan 表情更精密的。,但发觉其照方配药中不含钾水合氢。,据我看来变卖它如果会星力渗透压力? PH 的成绩,笔者不断地应用它。 HCl 调的,它缺席被应用。 H3PO4 或其盐,有缺席明确的的虾? PBS 有很多食谱。,无边的平稳的,笔者在这边说什么 PBS 磷酸钠缓冲溶液,自然,磷酸钾缓冲溶液。,即,KPBS,我做 IHC 应用磷酸钠缓冲溶液。,这 2 对试验的星力不被期望很大。。您可以检查与尺寸仓库中间使适应的某个文档。,写印刷体字母试验办法,用磷酸钠缓冲溶液或磷酸钾缓冲溶液标识表记标帜吗?。关于接管 PH 成绩,它通常受弱酸或弱碱性水合氢的容纳。,因而调整 PBS 的 PH 自然,它是H3PO4。 来容纳的,自然用 HCL 或许盐可以做到这短间隔。,但不经用。,并且 HCL 它是镪水,挥发性,轻微地修补一下就轻易了。:我给你的菜单,以防水是 PH 没成绩。,按照溶解物的确切的品质。 PBS 的 PH 为 摆布,终于可以举行修补。 PH 即,行过,户主可以朴质地看3。 PBS 指套表情: PBS 照方配药(~) (500 ml Na2HPO412H2O2(式量))) ) •2H2O2 (式量)) ) 0.295gNaCl 4.5gddH2O 500 ML参照表情(NaCl) 8.0g ;KCl 0.2g ;Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,容纳 pH 到 )是 1X DULBECCO S PHOSPHATE BUFFERED SALINE (PBS) WITHOUT CALCIUM, MAGNESIUM,当心,是杜尔巴卓 改善表情,省略 D-PBS,然后必须钙和镁的照方配药。,比如,是人 INVITROGEN 订的 Dulbecco s 汽水缓冲溶液 Saline (D-PBS) (10倍) liquid Contains calcium and 镁。 PBS – Phosphate Buffered Saline Formulation(HyClone):厂家的照方配药跟决定都很严谨的我试验战利品冰冻切片厚 20 微米,它是不常见的好的,它是,我所做的是膜感受器加里。。概括地说,切片构成好。,清晰度能染上颜色,细胞排队可能性更为明亮的。,只是值班人员和谐的的隐士细胞可能性是严重地的。,因它可能性被割断进入细胞体。,昏过去难以剖割。,后头我读了某个用纸覆盖。,有 14 微米的,20 微米的,30 微米的,甚至仍 40、50 微米的,在写印刷体字母中也有区别的版本。,根据我所持的论点这可能性与加里质散布的检测关心。、特质和丰富性等。,我 20 经两脚规能染上颜色,能染上颜色产生良好。,但我缺席剪。 30 微米构成,哈哈-告知我性格昏过去时的性格灵巧。,有组织的冷冻的时,必不可少的事物在有组织的上。、在上面添加相当的的量。 OCT。组织有组织的、上面有必然的收入仅敷支出的。,切片时,有组织的应使适应球在横向投资。,这警戒了有组织的切片做事方法打中压缩。。切片必不可少的事物与有组织的相仿性。,戒因切片不和谐的而漏诊。。 手在有组织的时不克不及改变。,并且在贴附有组织的时手命令任一向下地范围的举措。拉拔时刀片应尖利。,它被期望从全力上切到刀尖。,戒剖割剖割。,有组织的块钳应用无牙钳。、温顺的、戒挤压等。。你的切片是延续的。 24 孔板?以防是这样的事物,,打算谈谈切玩以来怎样选择脑片做组化的?就是说假设要拔取某任一或各自的投资的脑片( eg, bregma -1.2, 0.8, 2.2, ECT),被期望详细做些什么? 12 孔细胞培育物板(护卫队液),参照我的静止帖子。,可以搜索保持原状,当你需求能染上颜色时,取出任一洞。 free floating。切片的地方按次是人 A1,A2,A3B1,B2C4,第一轮后(每孔一孔) ,持续从 A1 开端入伙 C4,能染上颜色时要取一小孔。,每个洞都是一套全脑切片。,以防切片厚度为 30微米,因而每个影片的程度间隔都是 30微米×12,4你也可以把它放上。 10 分支影片,再次使适应球。这样的事物任一词,每分支影片都是 30uMX10。你也可以把它剪下来。 20,40,50uM,按照我的索取。论使适应,笔者必不可少的事物涉及人解剖的身负重担的人。。你可以提出一套影片。,作 CV 能染上颜色,这部影片将是你以来的基准参照。。CV能染上颜色后,你易于区别区别的地面。,以后,你会变卖哪个洞可能性坐落。。你正订出一种对称体。,二抗,ABC 它在哪里?据我看来节省对称体。,放在了 袖珍使离心管。此后 37 孵卵一小时。我用画笔来拍影片,我不断地把它们粘起来。,发作是什么?色在文明社会板上。。可以用注射细菌用的“电报”弯身成任一“p”扮演角色,用于捉鱼,因这种电线具有却更的易弯曲的。,它批评这么冷藏地应用。,大致如此缺席遗失脑片。。我普通也会订出对称体。 ep 管中。在免疫的组化的做事方法中,渔获物被A,仅仅当胶片放在滑板上时才应用矮小的人。。都洗完事。 24 孔板,间或它也用于孵化。 ml 的 EP 管。首要宁静对称体的变细。,以防变细度很高,摈除缩减气体才能以节省对称体。,也用 24 孔板培育。1。我用生理盐水贯注感情。,此后顶替应用 3贯注的分配 ,各 150千分之一升(卑鄙小人)。2。 4%3浸渍 1 夜;先沉 20%食糖,后沉 30%食糖(供应用) 0.1M PB 调和) ,20% 食糖底可以应用。,笔者的阅历是 再加30%天的糖。,另外的,剖割膜是脆的。,易成形薄带。3. 警戒切片打中孔,液态氮切削前的紧紧地上冻 1min,切冰机 -22℃)15min 后给人铺床。笔者先前缺席液态氮速冻。,被剪下的影片都是空的。。3、用 的 PBS 卑鄙小人脑有组织的贯注:鼠用 200ml 贯注液 。4、此后应用它 的生理盐水 贯注冲洗(200千分之一升) 。5、脑零件。6、用 25 – 30%糖浸泡 12—16 小时。取材,切片。但在切片在前,滤纸将被用来吸糖。。7、冰冻刨片机的高烧分二步。盒子外面的高烧是-20。 度,刀架的高烧为-16。 度。8、为了不剥离膜,聚L-lysine 赖氨酸可以涂布在CLE上。。9、以防有可供选择的事物免疫的有组织的化学待遇。。率先是捉鱼的办法。,这觉得太费力了。。体系结构拥有企业者的办法也必不可少的事物允许水草。,竟,我不断地应用用针灸术治疗针的办法。,这部影片要表明。 24 孔中,不常见的神速,水的在无能力的遗失钢材取样。,户主的做法很可能性损坏标本。。5秒,这种修补办法相当繁琐。,矮小的人可以变得钩形彩色铅笔。,补片在培育皿中举行。,先充分培育皿。 PBS(最好批评水等)。,把降低放在在淘洗中收获金子上。,一面在盘子次要的。,排队任一坡度的角度。,将切片用用针灸术治疗针(做成的捞勺)捞片于培育皿中(这样的事物全程都在水中的动手术护卫队标本) ,用钩子笔轻快地拖拽标本的正面(拖曳),这样的事物的钢材取样在水中的并非易事起皱纹或破败。 ,将标本拖到滑板上的正式的投资。,笔尖,与标本零件,富余的。 PBS 将依照培育皿。 PBS 气体流入培育皿,这样的事物任一词标本继续是某种社会地位的水会短时间地(这短间隔很重要,当你在显微镜下看这部影片时,你变卖为什么。!切片为卑鄙小人脊髓。,总额在 10 张摆布,因镗孔直径很小。,面积越小,切片的总额就越小。。 盒子里有用海绵吸收。。这块板是由创造商创造的。。扩张稻草的直径。,用威士忌使燃烧器烧痕。。配药补丁的环。。Triton—100,如今我正是气体社会地位。,让我告知你一件事。,我把封上液放上。 1 以千分之一升包装。,在添加前应用枪头。 3 袖珍耐火的人,努力顿是油性的。,枪头外壁轻易沾污。,添加到封上液打中气体量更多。,使遭受能染上颜色舍弃。如今我要用纸擦外堤。,就没成绩了。在某个境况下,这是无用的的。。能染上颜色和裱糊的办法叫。 whole-mount,有组织的标本包埋。这种办法通常是厚切片的。,可积累到 100um,更厚。因而户主不被期望撕咬附件。,你可以在手术中正好应用弯身送钻头工。。这种办法的优点是它更眼睛的。,真实感更强。更具统计资料意思。只是这种影片在性格做事方法中相当打扰。,因切片构成厚。,还需求 triton 跨膜等使移近。激光共聚焦最好用于值班人员。。最重要的是漂泊某个对称体。。O(∩_∩)O~5

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